ibidi流體剪切力實驗應用逐步說明了如何串聯連接多個Luer-Slides。優點是僅使用一個流體單元即可觀察和培養多個載玻片。當使用相同規格的載玻片時,載玻片中的流速是相同的。也可以通過連接不同高度的載玻片來改變剪切速率。
本次介紹了兩個載玻片連接的過程。但是它可以應用于大量的載玻片。
將一個塑料連接器插入通道載玻片的兩端(6厘米),以在載玻片之間連接起來。下圖是在兩端帶有兩個配套的Luer公接頭的連接器管??捎靡掖蓟蚋邏簻缇窘宇^。
*必須在無菌條件下執行以下步驟!
3. 播種細胞
· 準備1.67 · 106 cells/ml.的細胞懸液?! ?/p>
· 將150 µl注入通道。僅填充通道體積(圖1a)?! ?/p>
· 將帽蓋在Luer接頭上,并將載玻片放在培養箱中培養半小時來固定細胞。
· 細胞固定后,將兩邊儲液接口各加60 µl充滿。
4. 連接載玻片
現在準備載玻片,使細胞在通道中生長,并向儲液池中填充60 µl無細胞培養基(請參見第3節)?! ?/p>
· 在連接之前,將所有儲液器各加60 µl(圖1b)?! ?/p>
· 將連接器管的一個Luer適配器插入載玻片的一個母Luer適配器中(圖1c)?! ?/p>
· 將一些預備的培養基吸入注射器。倒轉注射器并將多余的空氣推出(圖1d)?! ?/p>
· 使用沒有氣泡的注射器在載玻片端口注入??赡軙行┮绯觯▓D1e)?! ?/p>
小心地將液體注入載玻片,直到連接器管中充滿為止(圖1f)
圖1:(a)接種細胞時的用量; (b)載玻片在連接之前已*填滿; (c)載玻片中插入連接管; (d)無氣泡的注射器; (e)將注射器插入載玻片一端; (f)用注射器推動介質來填充連接器管道
· 當連接器管道*充滿時(圖2a),將其插入第二張載玻片的接口上(圖2b-d)?! ?/p>
· 如果要連接兩個以上的載玻片,將第二個連接器管放在第二個載玻片空的另一端口上,用注射器推入介質,依此類推?! ?/p>
· 慢慢連接的所有載玻片將注射器從適配器上卸下(圖2e)。
· 要將載玻片連接到灌注套件,兩個Luer容器必須在頂部填充培養基??捎眉埥聿寥ミ^多的培養基?!?/p>
圖2:(a)連接管已*充滿; (b-c)將連接器管插入第二載玻片的魯爾接頭上; (d)帶有適配接頭管連接; (e)取下注射器; (f)擦去溢出的介質,并填充儲液罐以連接到灌注套件。
5. 連接到灌注裝置
將載玻片連接到灌注套件
圖片串聯安裝帶有兩個µ-Slides I Luer的一個流體單元。