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ibidi應用指南|免疫熒光實驗

更新時間:2022-12-26   更新時間:2022-12-26   點擊次數:1187次

  免疫熒光(IF)是使用顯微鏡深入了解細胞結構和過程的有效方法,可評估特定蛋白質的表達和位置,使得免疫熒光成為科學家解決許多細胞生物學問題的工具。

  

  免疫熒光實驗基于以下主要步驟:  

  1.特異性抗體與感興趣的蛋白質結合?! ?/p>

  2.熒光染料與這些免疫復合物偶聯,以便使用顯微鏡觀察感興趣的蛋白質?! ?/p>

  

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  內皮細胞中vWF的免疫熒光染色。肌動蛋白用phalloidin染色(綠色),細胞核用DAPI染色(藍色)。

  

  區分直接和間接免疫熒光。在直接免疫熒光中,一抗直接偶聯到熒光團(也稱為熒光色素),便于處理和快速可視化。在間接免疫熒光中,使用特異性結合一抗的二級熒光團偶聯抗體來可視化感興趣的結。

  

  盡管di二種方法比直接免疫熒光更耗時,但它有幾個顯著的優勢,比如它通常更便宜,因為二抗可以用于不同的一抗。此外,通過結合多個一抗和特定的二抗(每個抗體都用不同的熒光團標記),可以在單個樣品中平行特異地顯示多個蛋白質(多色免疫熒光)?! ?/p>

  

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  免疫熒光染色:典型的工作流程

  

  每個免疫熒光染色方案由培養、固定、染色、成像四個主要步驟組成,可細分如下:  

  

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  免疫熒光染色是一種非常敏感的方法,可能需要排除故障《免疫英冠染色故障排除指南》。方案中的微小變化可能會導致不同的結果,而這些結果不再具有可比性。因此,在您的特定方案中精確地保持相同的條件是非常重要的(例如,細胞密度、抗體稀釋度、培養溫度和培養時間)?! ?/p>

  

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  免疫熒光實驗方案對比

  

  傳統染色與ibidi方案染色

  

  當使用任何ibidi解決方案時,ibidi的免疫熒光染色方案比傳統方案要簡便快速的多。無需在松散的蓋玻片上生長細胞,細胞可直接在ibidi玻片上生長和染色?! ?/p>

  

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  用于免疫熒光應用的各種ibidi產品  

  

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